益視顆粒藥品標(biāo)準(zhǔn)研究

摘要  目的：通過提高益視顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，使其質(zhì)量更加可控。方法：采用高效液相色譜法（HPLC）測定制劑中制何首烏所含2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β- D葡萄糖苷的含量；色譜條件為：迪馬色譜柱（Diamonsil(鉆石)柱，250×4.6mm）；流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液（14：86）；檢測波長為230nm；流速為1.0ml/min。結(jié)果：2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β- D葡萄糖苷進(jìn)樣量在0.09296～0.32536μg范圍內(nèi)，與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)r=0.9999；平均回收率為98.81%，RSD值為0.26%。結(jié)論：定量方法準(zhǔn)確、可靠、專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好，用于該制劑的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞  益視顆粒；2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β- D葡萄糖苷；高效液相色譜法

前 言

益視顆粒由黨參、當(dāng)歸、制何首烏等14味藥材組成的純中藥制劑，具有滋腎養(yǎng)肝，健脾益氣，調(diào)節(jié)視力。臨床主要用于肝腎不足、氣血虧虛引起的青少年近視及視力疲勞者。為了更有效的控制該制劑質(zhì)量，保證其臨床療效及用藥安全性，在原有標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上做了進(jìn)一步研究工作，采用高效液相色譜法對制劑中主藥制何首烏進(jìn)行了定量方法研究，確定了以2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β- D葡萄糖苷為指標(biāo)性成分的含量測定方法；結(jié)果表明，該方法可靠、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，專屬性強(qiáng)，能有效地控制該制劑的內(nèi)在質(zhì)量。

 實驗方法與結(jié)果

1．儀器與試藥

儀器：日本島津LC-10AT_VP溶液輸送泵，SPD-10A_VP紫外檢測器，7725i手動進(jìn)樣器；浙江大學(xué)N-2000數(shù)據(jù)工作站，賽多利斯BP211D電子天平。

試劑：乙腈（色譜純）、水（重蒸餾水），其它試劑均為分析純。 2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β- D葡萄糖苷對照品，供含量測定用，批號：110844-200904，中國藥品生物制品檢定所提供。經(jīng)HPLC色譜測定純度在98.5%。

2．測定波長的選擇  取2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β- D葡萄糖苷對照品溶液（23.24μg/ml）適量，以溶劑為空白，在200～800nm波長處掃描，確定最大吸收波長，結(jié)果見圖6-1。

圖6-1  2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β- D葡萄糖苷對照品UV光譜圖

結(jié)果可見，對照品溶液在320nm處有最大吸收，故選擇320nm為測定波長。

3．色譜條件

色譜柱：Shim-pack，150×4.6mm。

流動相：乙腈-水（20∶80）。

流速：1.0 ml/min；檢測波長：320nm；進(jìn)樣量10μl；

在選定的條件下，2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β- D葡萄糖苷和樣品中其它組分色譜峰可基線分離，2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β- D葡萄糖苷與其它相鄰色譜峰的分離度大于1.5；按2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β- D葡萄糖苷對照品峰計算，理論塔板數(shù)(N)為2000以上，拖尾因子(T)為1.05。

4．對照品溶液的制備  取2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β- D葡萄糖苷對照品適量，加稀乙醇制成每1ml含20μg的對照品溶液。2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β- D葡萄糖苷對照品的HPLC色譜圖，見圖6-2。

圖6-2  對照品HPLC色譜圖

5．供試品溶液制備  供試品溶液的制備采用直接提取的方法，在提取方式上，對超聲提取、回流提取兩種方法進(jìn)行了比較研究，方法如下：

超聲提?。?/span>取本品適量，研細(xì)，取約2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，稱定重量，超聲處理（功率120W，頻率40kHz ）30分鐘，取出，放冷至室溫，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得。                  

回流提?。喝?/span>本品適量，研細(xì)，取約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，稱定重量，回流提取30分鐘，取出，放冷至室溫，再稱定重量，加稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液，即得。

取上述兩種供試液分別進(jìn)樣10μl，測定其含量，結(jié)果見表8。

表8  兩種提取方法2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β- D葡萄糖苷含量測定結(jié)果

提取方法                 超聲提取              回流提取

含量（mg/g）             0.113                  0.114

結(jié)果表明:超聲提取、回流提取所測2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β- D葡萄糖苷含量基本相同，而超聲比較簡便，所以提取方法采用超聲提取。

6．線性關(guān)系的考察 精密稱取2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β- D葡萄糖苷對照品，加稀乙醇制成每1ml含20μg的溶液，分別精密吸取4μl、6μl、8μl、10μl、12μl、14μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β- D葡萄糖苷進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見圖6-3。2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β- D葡萄糖苷標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果見表9。

表9 2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β- D葡萄糖苷標(biāo)準(zhǔn)曲線測定結(jié)果

序號          μl             μg                測得峰面積

1              4μl          0.09296             87033.602

2              6μl          0.13944             141723.594

3              8μl          0.18592             194596.547

4             10μl          0.23240             249010.125

5             12μl          0.27888             307143.656

6             14μl          0.32536             359346.313

結(jié)果表明：2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β- D葡萄糖苷在0.09296～0.32536μg范圍內(nèi)，峰面積積分值與2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β- D葡萄糖苷的量呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為Y=-22714.80824+1175442.471X ,相關(guān)系數(shù)r=0.9999。

                                   圖6-3 標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

7．精密度的測定  精密吸取同一對照品溶液10μl，重復(fù)測定5次;結(jié)果見表10。

表10 益視顆粒精密度測定結(jié)果

測定次數(shù)                樣品峰面積  

1                   399397.344     

2                   397074.000       

3                   393958.063       

4                   391889.625       

5                   395845.688

平均峰面積:  395632.944   RSD=0.73%

結(jié)果表明：本品的精密度良好。

8．重現(xiàn)性試驗  取同一批樣品，照供試品制備，制備5個供試樣，進(jìn)樣量為10μl；2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β- D葡萄糖苷對照品含量23.24μg/ml、峰面積為295181.438;測定結(jié)果見表11。

表11   重現(xiàn)性測定結(jié)果

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